國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光新技術(shù)，助力HCV精準(zhǔn)檢測(cè)
- 2023 - 12 - 05
國(guó)際知名期刊Frontiers in Cellular and Infection Microbiology雜志（IF=5.7）在11月27號(hào)刊登了一篇由上海公共衛(wèi)生臨床中心、北京大學(xué)第三醫(yī)院、北京大學(xué)人民醫(yī)院北京大學(xué)肝病研究所聯(lián)合署名的研究論文，“A new double-antigen sandwich test based on the light-initiated chemiluminescent assay for detecting anti-hepatitis C virus antibodies with high sensitivity and specificity”。該論文介紹了一種新型的雙抗原夾心法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的高靈敏度、高特異度的新方法，該方法基于光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)實(shí)現(xiàn)。
研究顯示，LiCA?Anti-HCV是一種高度準(zhǔn)確、具有超高靈敏度和特異度的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，它是一種非常有價(jià)值的工具，可用于輔助診斷HCV感染。
通過(guò)上海公衛(wèi)、北醫(yī)三院、北大人民肝病研究所臨床檢驗(yàn)中心超大臨床樣本（n=16,305）、多角度（靈敏度、特異性、HCV亞型、基因型和血清轉(zhuǎn)換盤、精密度、23種交叉反應(yīng)和干擾物、9種血漿與血清一致性、機(jī)載穩(wěn)定性、試劑批間差、儀器臺(tái)間差等）多中心臨床研究評(píng)價(jià)，與Architect anti-HCV雙盲比對(duì)，用RIBA和HCV RNA進(jìn)行結(jié)果確認(rèn)，科學(xué)、全面地評(píng)估了LiCA?Anti-HCV檢測(cè)性能。
研究數(shù)據(jù)結(jié)果
與Architect?相比，LiCA? Anti-HCV在靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度上表現(xiàn)明顯更好。特異性（99.91% VS. 99.14%，n=16,018）；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（95.29% VS. 67.06%，n=419，P＜0.0001）；總體準(zhǔn)確性（99.90% VS. 99.12%，n=16,305，P＜0.0001）。
對(duì)于LiCA? 與Architect?檢測(cè)不一致的樣本47例（0.28%, n=16,305）采用RIBA和HCV RNA確認(rèn)，46/47例為Architect?假陽(yáng)性，1/47為Architect?假陰性。
在239份HCV 1-6亞型樣本中，LiCA? Anti-HCV全部正確檢出所有病例。
對(duì)于HCV感染早期檢測(cè)，LiCA? 擁有比Architect?更高的靈敏度。LiCA? 的檢測(cè)窗口期明顯更短，比Architect?早3.7天（P=0.0056）。
在29個(gè)市售枸櫞酸鈉血清轉(zhuǎn)化盤評(píng)估HCV感染的早期檢測(cè)能力結(jié)果，14個(gè)血清盤LiCA?比Architect?更早檢測(cè)到血清學(xué)轉(zhuǎn)化（平均-8.8天），只有3個(gè)盤LiCA?比Architect?晚檢出（平均+5.3天），另外12個(gè)盤檢出時(shí)間相同。
LiCA? Anti-HCV擁有高靈敏度和高特異性的優(yōu)勢(shì)可以歸因于其采用的方法學(xué)。
LiCA?采用兩種納米級(jí)微球（鏈霉親和素包被的感光珠與重組病毒抗原包被的發(fā)光珠）和生物素標(biāo)記的抗原，通過(guò)生物素-鏈霉親和素模式，完成一步法雙抗原夾心免疫反應(yīng)。
如果樣本中存在HCV抗體，孵育后可形成免疫復(fù)合物。感光球和發(fā)光球通過(guò)抗體-抗原結(jié)合反應(yīng)鏈接在一起，導(dǎo)致兩者之間的距離<200 nm，感光球產(chǎn)生的單線態(tài)氧可以擴(kuò)散到發(fā)光球從而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。
當(dāng)樣本中不含HCV抗體，不會(huì)發(fā)生免疫結(jié)合反應(yīng)，感光球和發(fā)光球之間的距離>200 nm，單線態(tài)氧分子無(wú)法完成遷移，因此不產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。
正因?yàn)檫@種獨(dú)特的方法學(xué)原理，LiCA?檢測(cè)不需要任何洗滌步驟來(lái)分離免疫復(fù)合物與游離成分，也不會(huì)產(chǎn)生干擾信號(hào)影響結(jié)果。不像傳統(tǒng)免疫反應(yīng)，如洗滌不干凈，則會(huì)產(chǎn)生干擾信號(hào)。
該研究中的LiCA?Anti-HCV檢測(cè)基于雙抗原夾心反應(yīng)原理，兩種水平的抗原特異性鉗夾抗體，使非特異性結(jié)合可以減少到最低限度。夾心法的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可提高對(duì)新發(fā)感染者體內(nèi)產(chǎn)生的Anti-HCV IgM抗體的檢出能力，而間接法是不能識(shí)別這些IgM類抗體的。
LiCA?方法采用的納米級(jí)微球擁有更大的比表面積，其生物素-鏈霉親和素機(jī)制可放大反應(yīng)信號(hào)，這些因素也可提升檢測(cè)靈敏度。最近的研究表明，LiCA?方法在檢測(cè)促甲狀腺素、心肌肌鈣蛋白和新冠抗原等方面，具有優(yōu)異的檢出能力。
除了優(yōu)異的靈敏度和特異性，LiCA?抗-HCV在日間、不同試劑批號(hào)、不同儀器和樣品基質(zhì)中均表現(xiàn)良好的分析精密度和穩(wěn)定性。此外，該檢測(cè)采用均相免疫反應(yīng)，無(wú)需清洗，無(wú)人值守式全自動(dòng)運(yùn)行，在靈活性、生產(chǎn)率和成本效益方面具有優(yōu)勢(shì)，可適應(yīng)不同的需求場(chǎng)景，助力在全球范圍內(nèi)消滅HCV的終極目標(biāo)。
高靈敏度和高特異性對(duì)于保證臨床初篩結(jié)果的準(zhǔn)確性，尤其在低收入地區(qū)簡(jiǎn)化確認(rèn)實(shí)驗(yàn)流程、減少誤診，具有高敏感性和高特異性的可靠的篩查試驗(yàn)是至關(guān)重要的，從而為保證WHO 2030年消滅丙肝的目標(biāo)實(shí)現(xiàn)提供堅(jiān)實(shí)的初篩實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
文獻(xiàn)信息：Frontiers | A new double-antigen sandwich test based on the light-initiated chemiluminescent assay for detecting anti-hepatitis C virus antibodies with high sensitivity and specificity (frontiersin.org)